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作者:鐘偉平 趙閃閃 白紅梅來源:河南高教公眾號 編輯:鐘偉平 訪問次數:發布時間:2019-11-24

什麼是非洲豬瘟檢測?新的檢測技術與傳統檢測技術相比有哪些優勢?該檢測技術將應用在哪些領域?帶著這些疑問,記者找到紅足1世手機版食品安全生物標識快檢技術科研團隊王德國教授一探究竟。

近日,紅足1世手機版食品安全生物標識快檢技術科研團隊王德國教授課題組在非洲豬瘟檢測研究方面取得重要進展,建立了實時熒光等溫擴增技術和可視化等溫擴增技術(LAMP)快速檢測ASFV的方法。該檢測方法特異性強、靈敏度高、簡便易行、成本低,既適合實驗條件良好的部門使用,又適合實驗條件薄弱的基層部門使用,目前已在八家企業示範應用。

檢測成本低,給中小企業提供了便利

非洲豬瘟是由非洲豬瘟病毒感染家豬和各種野豬引起一種急性、出血性、烈性傳染病。因為目前還沒有研制出可靠的疫苗,前期診斷監測成為控制疫情的重要手段。目前豬瘟的防治采用隔離、沼氣的診斷辦法,檢測手段按國家農業部檔次認定的產品有三類︰“快速檢測試紙條”“熒光定量PCR檢測”“核酸等溫擴增技術”。

王德國教授課題組建立的實時熒光等溫擴增技術和可視化熒光等溫擴增技術(LAMP)快速檢測ASFV方法,相較于其他方法來說,大大降低了技術成本,給中小養殖企業提供了便利。舉個例子,用其他方法檢測單次市場價在100元左右,ASFV方法成本不到2元。王德國教授團隊還設計研發了檢測專用設備“水浴鍋”,申請了發明專利,購置一台水浴鍋只需要幾百元。

對規模較小、條件有限的企業,不具備購買熒光PCR儀的能力,可以使用“水浴鍋”設備和相關試劑進行檢測,技術要求較低,更加方便可行。前段時間,研發團隊對許昌周邊部分企業人員進行了專業的培訓,反響很不錯。”王德國教授解釋。

靈敏度高,檢測結果更加可靠

近期,王教授團隊相關研究成果以“Development of a real-time loop-mediated isothermal amplification (LAMP) assay and visual LAMP assay for detection of African swine fever virus (ASFV) ”為題,發表在國際學術SCI期刊Journal of Virological Methods上。此檢測方法靈敏度高,檢測限為30拷貝,適合于豬場早期診斷抗發病潛伏期階段。取樣采取血漿化驗、唾液檢測等方法,樣品量幾十毫克即可。

據團隊介紹,這項方法特異性強、靈敏度高、具有非常強的穩定性,不會在檢測中出現假陽性和漏檢,且增加了可視化效果,如擴增後試劑顏色保持橘紅色則為陰性,橘紅色變為淺黃色則為陽性。這種方法適合亞歐地區,比如中國、波蘭、烏克蘭、俄羅斯、朝鮮、越南、韓國這些地區的病毒監控,該地區出現的25個病毒基因類型都能夠被檢測到。

致力于食品安全與快速檢測

王德國教授課題組所在的河南省食品安全生物標識快檢技術重點實驗室籌建于2017年,2013年被批準為博士後科研工作站,2016年被河南省發改委批準為河南省工程實驗室。

實驗室圍繞食品安全領域的國際研究前沿,結合河南省食品安全快速檢測的實際需求,在核酸等溫擴增、分子印跡、小分子生物傳感等方向開展關鍵技術與理論研究。在核酸等溫擴增方面,研究引物篩選規律並建立篩選模型,闡釋初始模板產生機理,建立相應的DNA模板提取方法和擴增結果判讀新方法;在分子印跡檢測方面,篩選模板分子,優化合成方法,研究聚合物對模板分子的識別機理;在小分子生物傳感方面,合成、表征與優化小分子傳感器,研究熒光識別性能及機理。

實驗室研發的具有自主知識產權、國際領先的食源性致病菌、生物毒素、轉基因成分、摻假食品、農獸藥殘留等快檢產品與配套裝備,為食品安全監管與品質控制提供了技術支撐。

前期我們在基因檢測研究方面奠定了很好的基礎,這次非洲豬瘟病毒檢測研究實際上只花了6個月的時間,選擇基因、設計引物、建立試劑的一系列過程都很順利。希望讓更多的養殖企業能夠盡快從中受益。”王教授說。

受許昌市市場監督管理局委托,王德國教授課題組已幫助許昌市24家涉及豬肉加工的企業建立起熟肉制品中ASFV核酸的自檢方法(可視化LAMP方法)。目前,以該檢測方法為基礎,紅足1世手機版作為主要單位所起草的河南省地方標準《熟肉與熟肉制品中非洲豬瘟病毒核酸LAMP檢測方法》已正式通過立項初審。

(供稿︰紅足1世手機版)

 

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